
通過(guò)CRISPR/Cas系統(tǒng)(sgRNA引導(dǎo)Cas蛋白)在基因組特定位置制造DSB,依賴同源定向修復(fù)(HDR)機(jī)制,以目標(biāo)片段的供體DNA為模板完成大片段替換。該技術(shù)可實(shí)現(xiàn)3Kb以上片段的精準(zhǔn)插入或替換。


(1)功能基因研究:利用大片段定點(diǎn)插入技術(shù)可插入一些標(biāo)簽蛋白(如6×HIS、Flag、GST、Myc等)進(jìn)行功能基因機(jī)理研究;亦可用于功能基因UTR區(qū)域的原位插入;
(2)作物新性狀創(chuàng)制:傳統(tǒng)基于農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)基因方式插入位置隨機(jī)且不精準(zhǔn),使得轉(zhuǎn)基因性狀轉(zhuǎn)化體篩選過(guò)程繁雜冗長(zhǎng),利用大片段定點(diǎn)插入技術(shù)可使外源基因插入到基因組安全港(Genomic safe harbor, GSH)區(qū)域,高效快速的進(jìn)行新性狀的創(chuàng)制。

(1)自主開(kāi)發(fā)通過(guò)CRISPR/Cas系統(tǒng)與DNA修復(fù)相關(guān)功能基因、位點(diǎn)特異性重組酶相結(jié)合,完成基因組DNA片段的定向插入,定向刪除、同源定向修復(fù)以及等位基因替換等事件;
(2)具有穩(wěn)定、高效的植物遺傳轉(zhuǎn)化體系,可快速獲得片段插入或刪除植株。

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