雙分子熒光互補(bǔ)(Bimolecular Fluorescent Complimentary,BiFC)技術(shù)本質(zhì)上是一種蛋白質(zhì)片段互補(bǔ)技術(shù),將熒光蛋白多肽鏈在某些不保守的氨基酸處切開,形成不發(fā)熒光的N-和C-末端兩個(gè)多肽片段,將這兩個(gè)熒光蛋白片段分別與能發(fā)生相互作用的目標(biāo)蛋白進(jìn)行融合,在細(xì)胞內(nèi)共表達(dá)或體外混合這兩個(gè)融合蛋白時(shí),由于自標(biāo)蛋白質(zhì)的相互作用,熒光蛋白的兩個(gè)片段在空間上互相靠近互補(bǔ),重新構(gòu)建成完整的具有活性的熒光蛋白分子,從而產(chǎn)生熒光。

BiFC技術(shù)是驗(yàn)證蛋白質(zhì)相互作用的一種常規(guī)方法,不需要底物與輔助因子,通過激光共聚焦顯微鏡等常規(guī)儀器可直觀地檢測到熒光信號。
客戶提交實(shí)驗(yàn)詳細(xì)信息—對客戶提交信息和材料的確認(rèn)—選取合適的熒光片段和融合位置—設(shè)計(jì)引物擴(kuò)增并構(gòu)建載體—原生質(zhì)體的制備及瞬時(shí)轉(zhuǎn)化—圖片信息的采集和處理—撰寫提交實(shí)驗(yàn)報(bào)告。
(1)構(gòu)建載體圖譜和測序結(jié)果提供載體質(zhì)粒和菌株
(2)采集的原始圖片和實(shí)驗(yàn)報(bào)告