技術(shù)應(yīng)用

SMART技術(shù)是利用逆轉(zhuǎn)錄酶內(nèi)源的末端轉(zhuǎn)移酶活性，只需少量的Total RNA就可得到高質(zhì)量、高產(chǎn)量的cDNA文庫，更重要的是得到的cDNA能夠代表原有樣品中的mRNA的豐度，可以應(yīng)用于直接擴(kuò)增基因、構(gòu)建cDNA文庫、已知序列釣全長cDNA以及用于芯片檢測探針的擴(kuò)增等。

技術(shù)原理

SMART (Switching Mechanism At 5'end of the RNA Transcript)技術(shù)是在合成cDNA的反應(yīng)中通過使用3'末端帶Oligo(dG)的引物,在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下以mRNA為模板合成cDNA的一種實驗技術(shù)。其利用真核mRNA 的5'未端特有的“帽子結(jié)構(gòu)”,使用SMART引物的Oligo(dG)與合成cDNA末端配對后形成cDNA的延伸模板,逆轉(zhuǎn)錄酶會自動轉(zhuǎn)換模板，繼續(xù)延伸cDNA單鏈直到引物的末端，并通過RT-PCR合成第二鏈獲得dS-cDNA。由于有5'帽子結(jié)構(gòu)的mRNA才能利用這個反應(yīng)得到能擴(kuò)增的cDNA，因此擴(kuò)增得到的cDNA就是全長cDNA。

服務(wù)流程

客戶提交實驗材料詳細(xì)信息(建庫組織樣品或總RNA，候選蛋白序列信息)—總RNA提取cDNA合成及載體重組—轉(zhuǎn)化大腸桿菌或酵母菌制備文庫—文庫質(zhì)量檢測及質(zhì)粒提取—誘餌菌株自激活檢測及互作篩選—數(shù)據(jù)采集及處理并撰寫提交實驗報告。

交付內(nèi)容

（1）提供足量的大腸文庫甘油菌和文庫質(zhì)?；蛘呓湍肝膸旄视途?文庫容量>1x10⁷ CFU、陽性率>95%)；

（2）詳細(xì)的word電子版實驗報告(含原始實驗數(shù)據(jù))；

（3）陽性克隆測序結(jié)果。