
酵母單雜交技術(shù)應(yīng)用于驗(yàn)證轉(zhuǎn)錄因子與基因上游順式作用元件是否有作用關(guān)系;也可以通過已知的基因上游的順式作用元件,通過酵母單雜交文庫篩選目標(biāo)基因上游的反式作用因子,助力于功能基因的研究。


酵母單雜交技術(shù)是研究蛋白與DNA相互作用的一種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)。以酵母的遺傳為背景,研究真核生物反式作用因子與DNA互作的一種實(shí)驗(yàn)技術(shù)。該技術(shù)是Prey蛋白與GAL4的激活結(jié)構(gòu)域 (AD)融合,把特定的目的基因順式作用元件與基本啟動子或微小啟動子(mini promoter,Pmin)連接,與下游報(bào)告基因結(jié)合;當(dāng)Prey蛋白與目的基因順式作用元件結(jié)合時(shí),激活Pmin轉(zhuǎn)錄,并啟動報(bào)告基因表達(dá)。根據(jù)報(bào)告基因的表達(dá)情況,就可以反應(yīng)反式作用因子與基因上游順式作用元件是否有作用關(guān)系。

客戶提交實(shí)驗(yàn)材料詳細(xì)信息(候選蛋白序列、順式調(diào)控元件DNA序列等)—客戶提交信息確認(rèn)—構(gòu)建誘餌菌株以及候選蛋白表達(dá)載體—誘餌菌株自激活檢測及酵母轉(zhuǎn)化—互作篩選及稀釋點(diǎn)種驗(yàn)證—數(shù)據(jù)采集及處理并撰寫提交實(shí)驗(yàn)報(bào)告。

(1)提供元件與報(bào)告基因和候選蛋白與AD融合的酵母表達(dá)載體序列信息;
(2)篩選培養(yǎng)后的圖片采集和處理信息;
(3)詳細(xì)的酵母單雜交實(shí)驗(yàn)步驟。